Photometrie

Extinktion

• Schnelle und einfache direkte Messmethode
• Ungefährlich und stabil, da keine Chemikalien eingesetzt werden müssen
• Gibt Aufschluss über die Probenreinheit

Fluoreszenz

• Hohe Sensitivität; daher besonders für die Analyse von Proben it geringer Konzentration geeignet; spart kostbares Probenmaterial
• Hohe Genauigkeit durch die hohe Spezifität für das Zielmolekül

Kinetic

• Messung über eine Zeitspanne mit verlässlicher Temperaturkontrolle der Reaktionen durch den Küvettenschacht mit integriertem Peltierelement
• Zeitsparende Bearbeitung, da das Zeitfenster nach der Messung angepasst werden kann, einschließlich statistischer Daten über die Kurvenpassung

Fluoreszenzproben

Die UV-basierte Quantifizierung von Nukleinsäuren hat Grenzen, die durch Fluoreszenzdetektion, qPCR, oder Chip-Kapillarelektrophorese-Systeme überwunden werden können.

Die Menge an Nukleinsäure wird auf der Grundlage der Intensität des Fluoreszenzsignals gemessen. Für die Anregung und Detektion wird ein Fluorometer oder ein Photometer mit Fluoreszenz-Modul benötigt.

Die Quantifizierung von Nukleinsäuren anhand von Fluoreszenz erfolgt mittels fluoreszierenden Farbstoffen, die sich an die Nukleinsäuren binden. Nur die aus Nukleinsäure und Farbstoff bestehenden Komplexe werden durch das Licht einer bestimmten Wellenlänge angeregt (je nach verwendetem Farbstoff) und geben somit Licht mit einer etwas längeren Wellenlänge ab.

Kinetischer Prozess

Messungen der Enzymaktivität müssen sehr oft bei einer bestimmten Temperatur durchgeführt werden. Um Messabweichungen zu reduzieren, muss der Küvettenschacht des Spektrometers temperierbar sein.

Die Enzymaktivität [U/mg] kann zeitaufwendig von Hand oder schnell und einfach mit einem Spektrometer gemessen werden. Dabei ist die softwarebasierte »lineare Regression «ein hilfreicher Faktor bei der präzisen Bestimmung des linearen Bereichs einer kinetischen Messung.

Transmissionsproben

Die Transmission wird auf Basis des Verhältnisses von l (durch die Küvette durchgelassenes Licht) zu I0 (in die Küvette einfallendes Licht) berechnet und in Prozent als %T angegeben.

Alternativ zu den Datenausgaben für Extinktion und Konzentration, haben Sie mit der vorprogrammierten Methode Transmission des BioPhotometer D30 und der BioSpectrometer die Möglichkeit, die prozentuale Transmission der Probe zu ermitteln. Bei der Methode Transmission wird die Lichtdurchlässigkeit der Probe als ein Wert T% an Stelle des Extinktionswerts ausgegeben, der dann direkt zur Berechnung der Probenkonzentration verwendet werden kann. Diese Rohdaten sind auch als Grundlage für weitere Berechnungen geeignet.

T = I/I0
%T = I/I0 * 100
Das Photometer berechnet die Extinktion (A) automatisch
anhand der gemessenen Transmission (T).
A = -log10T = lg(I0/I)